全网最大投注平台 蚯蚓凍亚投彩票我的账户的纖溶酶凍干粉的方法

    蚯蚓凍亚投彩票我的账户在藥材凍亚投彩票我的账户制備蚯蚓纖溶酶凍干粉的方法⑰⑱⑲⑳⓪⓿❶❷❸❹❺！真空冷凍干燥技術簡稱凍干技術✤✥❋✦✧✩✰✪✫✬✭✮✯❂✡★✱✲✳✴，是一項對食品護色①②③④⑤⑥⑦⑧⑨⑩⑪⑫⑬⑭⑮⑯、保鮮☾☽❄☃、保質的高新加工技術☈⊙☉℃℉❅。目前廣泛用于果蔬✵✶✷✸✹✺✻✼❄❅、肉禽⒥⒦⒧⒨⒩⒪⒫⒬⒭⒮⒯⒰⒱⒲⒳⒴⒵❆❇❈❉❊†☨✞✝☥☦☓☩☯、水產☾☽❄☃、調味品⒃⒄⒅⒆⒇⒈⒉⒊⒋⒌⒍⒎⒏⒐⒑⒒⒓、方便食品及名優特產等干燥⑰⑱⑲⑳⓪⓿❶❷❸❹❺，可達到保持食品原有的色①②③④⑤⑥⑦⑧⑨⑩⑪⑫⑬⑭⑮⑯、香㊀㊁㊂㊃㊄㊅㊆㊇㊈㊉、味☧☬☸✡♁✙♆。，、＇：∶；、形⒔⒕⒖⒗⒘⒙⒚⒛ⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦⅧⅨⅩⅪⅫⅰⅱ、新鮮度不變的目的❋❀⚘☑✓✔√☐☒✗✘ㄨ✕✖✖⋆✢✣，且復水性特好❋❀⚘☑✓✔√☐☒✗✘ㄨ✕✖✖⋆✢✣，成品便于貯存和運輸⒔⒕⒖⒗⒘⒙⒚⒛ⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦⅧⅨⅩⅪⅫⅰⅱ，費用降低✤✥❋✦✧✩✰✪✫✬✭✮✯❂✡★✱✲✳✴，保存期延長⑰⑱⑲⑳⓪⓿❶❷❸❹❺。在干燥蜂皇漿㊀㊁㊂㊃㊄㊅㊆㊇㊈㊉、人參☾☽❄☃、龜♀☿☼☀☁☂☄、鱉☈⊙☉℃℉❅、蚯蚓等營養保健品✤✥❋✦✧✩✰✪✫✬✭✮✯❂✡★✱✲✳✴，采用真空冷凍干燥工藝☈⊙☉℃℉❅，更使人們相信該營養品純真自然♀☿☼☀☁☂☄。

真空凍亚投彩票我的账户制備蚯蚓纖溶酶凍干粉的方法ⓊⓋⓌⓍⓎⓏⓐⓑⓒⓓⓔⓕⓖⓗⓘⓙ，其特征在于♀☿☼☀☁☂☄，包括如下步驟：

    步驟一✤✥❋✦✧✩✰✪✫✬✭✮✯❂✡★✱✲✳✴、蚯蚓粗粉的制備：將活蚯蚓✺ϟ☇♤♧♡♢♠♣♥，饑餓一天☾☽❄☃，自然吐凈泥沙⒔⒕⒖⒗⒘⒙⒚⒛ⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦⅧⅨⅩⅪⅫⅰⅱ，洗滌ⓣⓤⓥⓦⓧⓨⓩ，而后在溫度介于2035℃的通風條件干燥并制成粉碎❻❼❽❾❿⓫⓬⓭⓮⓯⓰，通過100200目篩制成蚯蚓粗粉⑰⑱⑲⑳⓪⓿❶❷❸❹❺；

    步驟二⒥⒦⒧⒨⒩⒪⒫⒬⒭⒮⒯⒰⒱⒲⒳⒴⒵❆❇❈❉❊†☨✞✝☥☦☓☩☯、粗酶溶液的制備：取蚯蚓粗粉用2倍體積的0.1mol/Lⓣⓤⓥⓦⓧⓨⓩ，pH為7.8的磷酸緩沖液PBS勻漿⓱⓲⓳⓴⓵⓶⓷⓸⓹⓺⓻⓼⓽⓾，加0.1mol/LNaCl溶液⒃⒄⒅⒆⒇⒈⒉⒊⒋⒌⒍⒎⒏⒐⒑⒒⒓，置于4℃冰箱內過夜⑰⑱⑲⑳⓪⓿❶❷❸❹❺，然后以10000r/min⒃⒄⒅⒆⒇⒈⒉⒊⒋⒌⒍⒎⒏⒐⒑⒒⒓，4℃離心15min❋❀⚘☑✓✔√☐☒✗✘ㄨ✕✖✖⋆✢✣，棄沉淀ⅲⅳⅴⅵⅶⅷⅸⅹⒶⒷⒸⒹ，取上清⒔⒕⒖⒗⒘⒙⒚⒛ⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦⅧⅨⅩⅪⅫⅰⅱ；上清液于50℃水浴保溫40min❣❦❧♡۵，流水冷卻☾☽❄☃，再8000r/min웃유ღ♋♂，4℃離心10min✵✶✷✸✹✺✻✼❄❅，取上清⒜⒝⒞⒟⒠⒡⒢⒣⒤，在上清液中加硫酸銨達30％飽和度☧☬☸✡♁✙♆。，、＇：∶；，靜置3小時㊀㊁㊂㊃㊄㊅㊆㊇㊈㊉，再8000r/min✵✶✷✸✹✺✻✼❄❅，4℃離心10min❻❼❽❾❿⓫⓬⓭⓮⓯⓰；收集上清液再加硫酸銨達70％飽和度⒔⒕⒖⒗⒘⒙⒚⒛ⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦⅧⅨⅩⅪⅫⅰⅱ，靜置3小時ⓣⓤⓥⓦⓧⓨⓩ，再8000r/minⓊⓋⓌⓍⓎⓏⓐⓑⓒⓓⓔⓕⓖⓗⓘⓙ，4℃離心10min⒔⒕⒖⒗⒘⒙⒚⒛ⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦⅧⅨⅩⅪⅫⅰⅱ，收集沉淀⒃⒄⒅⒆⒇⒈⒉⒊⒋⒌⒍⒎⒏⒐⒑⒒⒓；將沉淀溶于上述緩沖液中✵✶✷✸✹✺✻✼❄❅，對上述緩沖液以載留5KD分子量的透析袋透析過夜去鹽①②③④⑤⑥⑦⑧⑨⑩⑪⑫⑬⑭⑮⑯，再將透析液8000r/min웃유ღ♋♂，4℃離心10min❻❼❽❾❿⓫⓬⓭⓮⓯⓰，取上清液即為蚯蚓纖溶酶粗酶溶液✵✶✷✸✹✺✻✼❄❅；

       步驟三⑰⑱⑲⑳⓪⓿❶❷❸❹❺、粗酶的純化：將蚯蚓纖溶酶粗酶溶液過Sephadex G75凝膠層析ⓊⓋⓌⓍⓎⓏⓐⓑⓒⓓⓔⓕⓖⓗⓘⓙ，上柱前預先用0.02mol/LⒺⒻⒼⒽⒾⒿⓀⓁⓂⓃⓄⓅⓆⓇⓈⓉ，pH為7.8的磷酸緩沖液平衡㈧㈨㈩⑴⑵⑶⑷⑸⑹⑺⑻⑼⑽⑾⑿⒀⒁⒂，上柱后用上述緩沖液洗脫至在280nm波長無光吸收⑰⑱⑲⑳⓪⓿❶❷❸❹❺，洗脫液出現2個蛋白峰㈧㈨㈩⑴⑵⑶⑷⑸⑹⑺⑻⑼⑽⑾⑿⒀⒁⒂，其中酶活性峰與第1個蛋白峰重疊❻❼❽❾❿⓫⓬⓭⓮⓯⓰，收集重疊部分的酶液✺ϟ☇♤♧♡♢♠♣♥，過DEAECellulose A52離子交換柱✵✶✷✸✹✺✻✼❄❅，過柱前先用0.05mol/L⒔⒕⒖⒗⒘⒙⒚⒛ⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦⅧⅨⅩⅪⅫⅰⅱ，pH為7.8的PBS平衡❻❼❽❾❿⓫⓬⓭⓮⓯⓰；然后用含00.5mol/L NaCl的PBS離子強度線性梯度洗脫✤✥❋✦✧✩✰✪✫✬✭✮✯❂✡★✱✲✳✴，洗脫液出現3個蛋白峰ⓊⓋⓌⓍⓎⓏⓐⓑⓒⓓⓔⓕⓖⓗⓘⓙ，酶活性峰與蛋白峰第3峰重疊☈⊙☉℃℉❅，其余2個蛋白峰基本無酶活性⒜⒝⒞⒟⒠⒡⒢⒣⒤，收集活性部分即為蚯蚓纖溶酶純酶ⅲⅳⅴⅵⅶⅷⅸⅹⒶⒷⒸⒹ；

     步驟四ⓚⓛⓜⓝⓞⓟⓠⓡⓢ、蚯蚓纖溶酶的修飾：加入蚯蚓纖溶酶純酶和活化的PEG到15mL⑰⑱⑲⑳⓪⓿❶❷❸❹❺，pH9.2㈧㈨㈩⑴⑵⑶⑷⑸⑹⑺⑻⑼⑽⑾⑿⒀⒁⒂，0.1mol/L的硼酸緩沖液中♦☜☞☝✍☚☛☟✌✽✾✿❁❃，純酶與PEG的重量比是1:50ⅲⅳⅴⅵⅶⅷⅸⅹⒶⒷⒸⒹ，在30℃下♦☜☞☝✍☚☛☟✌✽✾✿❁❃，保溫反應1小時ⒺⒻⒼⒽⒾⒿⓀⓁⓂⓃⓄⓅⓆⓇⓈⓉ，反應物對0.1mol/L㊀㊁㊂㊃㊄㊅㊆㊇㊈㊉，pH7.3的磷酸緩沖液透析過夜✵✶✷✸✹✺✻✼❄❅，透析液再以10000r/min㊀㊁㊂㊃㊄㊅㊆㊇㊈㊉，4℃離心l0min✵✶✷✸✹✺✻✼❄❅， 取上清液過柱Sephadex G75⒔⒕⒖⒗⒘⒙⒚⒛ⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦⅧⅨⅩⅪⅫⅰⅱ，收集活性成分ⓣⓤⓥⓦⓧⓨⓩ，即為蚯蚓纖溶酶修飾酶✵✶✷✸✹✺✻✼❄❅；

步驟五❻❼❽❾❿⓫⓬⓭⓮⓯⓰、蚯蚓纖溶酶凍干粉的制備：將蚯蚓纖溶酶修飾酶裝在樣品盤里⒃⒄⒅⒆⒇⒈⒉⒊⒋⒌⒍⒎⒏⒐⒑⒒⒓，料厚不超過8mm㈧㈨㈩⑴⑵⑶⑷⑸⑹⑺⑻⑼⑽⑾⑿⒀⒁⒂，放進真空冷凍干燥機設備干燥室內進行凍干✵✶✷✸✹✺✻✼❄❅，于-35℃冷凍12小時⒃⒄⒅⒆⒇⒈⒉⒊⒋⒌⒍⒎⒏⒐⒑⒒⒓，然后在5pa的真空度下⒜⒝⒞⒟⒠⒡⒢⒣⒤，升溫至30℃㊀㊁㊂㊃㊄㊅㊆㊇㊈㊉，干燥12小時♦☜☞☝✍☚☛☟✌✽✾✿❁❃；繼續升溫至40℃㈧㈨㈩⑴⑵⑶⑷⑸⑹⑺⑻⑼⑽⑾⑿⒀⒁⒂，真空干燥14小時ⓚⓛⓜⓝⓞⓟⓠⓡⓢ，得到蚯蚓纖溶酶修飾酶的凍干粉①②③④⑤⑥⑦⑧⑨⑩⑪⑫⑬⑭⑮⑯，其含水量為7.0%❣❦❧♡۵，蛋白含量為68%☾☽❄☃，酶活力為1700U/mg①②③④⑤⑥⑦⑧⑨⑩⑪⑫⑬⑭⑮⑯。